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MSTO-211H細胞（提供STR鑒定報告）
?。?）英文名稱：MSTO-211H
?。?）中文名稱：人肺癌細胞
?。?）細胞描述：MSTO-211H細胞株是1985年從一位肺二相間皮瘤患者的胸水中建株的。這個病人接受過多種藥物聯(lián)合前期化療。MSTO-211H細胞具有高親和力的EGF結(jié)合位點，并表達神經(jīng)元特異性烯醇酶(NSE)及人絨毛膜促性腺激素(HCG)的α與β亞基。未檢測到左旋多巴胺脫羧酶(DDC)，邦巴辛與神經(jīng)tensin。細胞過表達c-myc原癌基因，并沒有觀察到基因重排或擴增。V-src,v-abl,v-erbB,c-raf1,Ha-ras,Ki-ras,和N-ras的表達呈陽性。未檢測到N-myc,L-myc,c-myb。在本庫通過STR鑒定結(jié)果正確。
?。?）規(guī)格：T25方瓶或1ml凍存管
?。?）細胞數(shù)量：1×10^6
?。?）組織來源：人肺癌
?。?）生長方式：貼壁生長
（8）細胞形態(tài)：上皮型
?。?）培養(yǎng)液：RPMI-1640+10%FBS+1%P/S
?。?0）培養(yǎng)條件：37℃，5%CO2
?。?1）運輸方式：常溫運輸（T25方瓶）或干冰運輸（凍存管）
細胞處理：
1）凍存細胞的復(fù)蘇：
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。
下面T25瓶為例；
1.細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.
2.1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3.將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
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