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　　細胞庫RBL-2H3大鼠嗜堿性細胞白血病細胞是1978年國立牙科研究所的免疫學實驗室從Wistar大鼠保持腫瘤狀態(tài)的嗜堿性細胞中分離和克隆出來的嗜堿性白血病細胞株。這些細胞具有高親和力的IgE受體。通過集聚這些受體或與鈣離子載體協(xié)同作用可以激活它們分泌組胺及其他遞質(zhì)。這株細胞廣泛地用于研究肥大細胞FcERI和分泌的生化途徑。RBL-2H3細胞是研究FcERI結(jié)構(gòu)的模型。它們廣泛地用于研究細胞分泌的不同方面，包括細胞內(nèi)鈣濃度改變、磷酸脂酶激活、蛋白激酶和小G蛋白的作用。雖然幾乎所有批號的FBS都支持細胞的生長，但在某些批號中FcERI集聚后脫粒化得更好。另一株大鼠嗜堿性細胞株(RBL，ATCC CRL-1378)不會脫?；?/p>

　　細胞特性

　　1) 來源：大鼠外周血

　　2) 形態(tài)：成纖維細胞，貼壁生長

　　3) 含量：>1x106  細胞數(shù)

　　4) 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

　　5)  用途：僅供科研使用。

　　運輸和保存

　　干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞

　　(1)1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

　　(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

　　細胞接收后的處理

　　1)收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

　　2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照(10×，20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

　　3)貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

　　4)備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

　　一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

　　1) 準備MEM 培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清15%;雙抗，1%。

　　2) 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

　　3) 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

　　二.細胞處理：

　　1) 凍存細胞的復(fù)蘇：

　　將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

　　2) 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

　　對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

　　1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL)，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間)，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

　　3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

　　3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

　　下面T25瓶為例;

　　1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

　　2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

　　3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

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